大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞是來源于脂肪組織的干細(xì)胞，與其它成體干細(xì)胞一樣具有自我更新和多向分化的能力。人和鼠的脂肪組織均可用于分離ADSCs，其中鼠脂肪組織通常取自腹股溝處脂肪墊。
大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)步驟：
1、10天齡到4周齡大鼠1只，麻醉處死，75%乙醇浸泡消毒3~5min。無菌條件下切開腹股溝皮膚，暴露腹股溝脂肪墊。
2、鈍性剝離脂肪組織，清洗并去除筋膜組織及小血管。將脂肪墊剪碎，轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。
3、加入3~4倍體積的0.1%I型膠原酶溶液，37℃水浴振蕩約20min，直至細(xì)胞混合物成乳狀濃稠液體。期間可吹打脂肪組織，輔助消化。
4、250×g，4℃，離心5min。注意離心機(jī)預(yù)冷至4℃。
5、小心吸去上層油脂，注意不要破壞位于下方的膠狀沉淀。加人5mL*培養(yǎng)基，重懸沉淀，轉(zhuǎn)移到新的離心管中，再次離心5min。
6、重復(fù)洗滌一次，吸去上清。
7、加入8mL*培養(yǎng)基重懸沉淀，轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中，置于37℃，5%CO2溫箱中。
8、待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)48h后初次觀察、換液。
9、換液時(shí)通過棄去培養(yǎng)基，從而去除未貼壁的細(xì)胞。
10、以后每?jī)商旄鼡Q一次培養(yǎng)基，細(xì)胞匯合達(dá)80%-90%時(shí)，0.25%胰蛋白酶消化，按1:2或1:3比例首次傳代。
大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞注意事項(xiàng)：
1、取材時(shí)應(yīng)將組織清洗干凈，仔細(xì)剝離去除血管和筋膜組織。
2、脂肪組織在剪碎的過程中不能研磨，以免破壞細(xì)胞。
3、消化完后的組織在離心前把離心機(jī)預(yù)冷，使細(xì)胞更好的與油脂分離。
4、用明膠或者膠原蛋白處理培養(yǎng)皿底壁，有利于細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)。
更新時(shí)間：2022-08-18
點(diǎn)擊次數(shù)：1813
當(dāng)前位置：
